EPR Plasmid #1026: Pcoa-CRISPRi (pbp1)
Plasmid Details
| Purpose | Express dCas9 under staphylococcus aureus coa promoter, and constitutive P3 promoter expressing sgRNA targeting pbp1 gene. Plasmid was constructed to be a Shuttle vector for E. coli and S. aureus. Selectable marker for E. coli is Ampicillin and for S. aureus is Chloramphenicol. However, we were not successful to transfer the construct in S. aureus. |
| Depositing Lab |
Christian Lentz UiT- The Arctic University of Norway - Department of Medical Biology |
| Depositing Scientist | Julia Kloos |
| Antibiotic Resistance | Ampicillin |
| Bacterial Growth Temp | 27 |
| Copy Number | High |
| Selectable Marker | |
| Final expression system: | Bacterial cells |
| Insert type: | sgRNA |
| Reference |
A programmable, selection-free CRISPR interference system in Staphylococcus aureus for long-term host interaction studies. Miah R et al. iScience 2025 PubMed DOI See other plasmids from this publication |
| MTA and Terms |
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How to Cite This Reagent
IN THE MATERIALS & METHODS:
Pcoa-CRISPRi (pbp1) was a gift from Christian Lentz (European Plasmid Repository plasmid #1026).
Pcoa-CRISPRi (pbp1) was a gift from Christian Lentz (European Plasmid Repository plasmid #1026).
IN THE REFERENCES:
Miah R et al.. A programmable, selection-free CRISPR interference system in Staphylococcus aureus for long-term host interaction studies.. iScience 2025 doi:10.1016/j.isci.2025.113420 PubMed 40978147
Miah R et al.. A programmable, selection-free CRISPR interference system in Staphylococcus aureus for long-term host interaction studies.. iScience 2025 doi:10.1016/j.isci.2025.113420 PubMed 40978147
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